|  产品说明书

MU004A6_EOMX-D101R_MC3T3-E1（小鼠颅顶前骨细胞）_成骨R_电子版.pdf

MU004A6_EOMX-D101_MC3T3-E1（小鼠颅顶前骨细胞）_成骨_电子版.pdf

MU034A6_EFMX-D102_3T3-L1（脂肪前体细胞）_成脂_电子版.pdf

MU034A6_EFMX-D102R_3T3-L1（脂肪前体细胞）_成脂R_电子版.pdf

|  举例说明：成骨诱导步骤

（以下步骤仅供参考，详情参见说明书）

1. 接种诱导细胞：取对数生长期的细胞，按照2×10^4cells/cm₂的细胞密度接种至包被后的培养器皿中，于37℃，5% CO²培养环境下培养至汇合度60-70%，弃掉上清，加入成骨诱导分化培养基。

2. 细胞分化诱导：每2-3天更换成骨诱导培养基，于37℃，5% CO²培养环境下培养约14-21天，并注意观察细胞形态变化。根据细胞钙盐结晶析出和钙质结节形成的情况，决定终止细胞诱导的时间，进行染色鉴定。

3. 细胞固定：吸去培养基使用适量1×PBS清洗一次，弃去后取适量4%中性甲醛溶液覆盖培养器皿底面，室温固定30-60 min，弃去固定液再使用1×PBS清洗两次。

4. 茜素红染色：加入适量茜素红染液染3~5min，吸去茜素红染液，用1×PBS清洗两次，并加入适量1×PBS避免细胞干燥。

5. 诱导评估：显微镜下观察成骨染色效果，并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时，钙质结节会与茜素红染料结合后呈现红色或橘红色。

|  举例说明：成脂诱导步骤

（以下步骤仅供参考，详情参见说明书）

1.接种诱导细胞：取对数生长期的细胞，按照2×10^4cells/cm₂的细胞密度接种至包被后的培养器皿中，于37℃，5% CO²培养环境下培养至汇合度90-100%，弃掉上清，加入成脂诱导分化培养基诱导液。

2. 细胞分化诱导：于37℃，5% CO²培养环境下培养约3天，更换为成脂诱导分化培养基维持液，培养1天后，再更换为成脂诱导分化培养基诱导液，继续培养3天。

按照以上换液频率诱导14-21天，并注意观察细胞形态变化。根据细胞诱导形成的脂滴数量和大小，决定终止细胞诱导的时间，并进行染色鉴定。

3. 细胞固定：吸去培养基,使用适量1×PBS清洗一次，弃去后取适量4%中性甲醛溶液覆盖培养器皿底面，室温固定30-60min，弃去固定液再使用1×PBS清洗两次。

4. 油红O染色：取生理盐水或1×PBS与油红O原液配制油红O工作液（油红O原液: 生理盐水=3:2），现用现配。

向清洗干净的诱导孔内加入适量工作液，静置染色30min；吸走油红O工作液，用1×PBS清洗两次，并加入适量1×PBS避免细胞干燥。

5. 诱导评估：显微镜下观察成脂染色效果，并进行图像采集和诱导评估；诱导成功时，脂滴会与油红O染料结合后呈现红色或橘红色。