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MixClone™基因敲除细胞池(Cell Pool)构建服务是针对各种常用的细胞系,进行基因敲除的一个快速服务。可以提供从gRNA设计(Protein-KO™)、载体构建、细胞株转染与扩增;可选服务包括:细胞池冻存,在确定表型之后再进行单克隆筛选和验证,获得表型满足需求的单克隆。


主要提供:以海星生物"Protein-KO™多导算法"为基础,构建快速的Cas9介导的大片段基因敲除(非移码)或者是一组多个sgRNA打靶外显子导致细胞目的基因蛋白缺失,基因敲除细胞池(Cell Pool)可以将基因蛋白最大程度的消除,比RNAi获得的数据更加确定、速度更快,目前可以用于构建各种难以获得单克隆的基因敲除研究或者原代细胞和干细胞的研究,也适用于各种致死基因(完全敲除致死的基因)的敲低(Knockdown)研究。


使用Cas9的进行细胞系基因敲除的过程中发现:不同的位点不同的细胞系的不同的gRNA效率差异很大(特别是蛋白的敲除效率),而且不同基因的表型也不同,有些表型容易导致细胞的增殖受到抑制,如何进行这一类细胞或者基因的研究,我们推出的MixClone™ Cell Pool构建的服务,特别适合于对基因不需要完全敲除,基因影响细胞生长的基因功能,或者无法获得单克隆的项目研究。


|   Cas9X使用新的Protein-KO™算法模型将蛋白敲除效率进行大幅的提升

1. 使用多个导向的gRNA,提高效率的同时大幅提升蛋白的敲除效率;
2. 使用高效的电转设备和转染试剂,具备更高的电转效率和细胞存活率;
3. 可以选择VIRUS-Free™技术,大幅的获得蛋白表型稳定细胞池。
  
通过优化,
周期比病毒法更短:快至3周进行细胞基因表型研究。

|   技术原理图 

基因敲除Cell Pool服务


片段敲除策略


基因敲除Cell Pool服务

Multi-sgRNA


|   技术流程图

基因敲除Cell Pool服务


|   细胞工作流程


基因敲除Cell Pool服务

后续服务:可以按照客户的研究的需要先构建好Cell Pool并交付给客户进行表型研究,如果获得的效果能够满足要求,再复苏之前的Cell Pool进行单克隆,筛选获得单克隆再进行研究。

我们还能为您提供:


  • 客户成果

      客户成果

  • 案例分析

      案例分析

  • 参考文献

      参考文献

    • 1. Ran, F.A. et al. Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system. Nat. Protoc. 8, 2281–2308 (2013).

      2. Sojung Kim, D.K. Highly efficient RNA-guided genome editing in human cells via delivery of purified Cas9 ribonucleoproteins. Genome Res. 10.1101/gr.171322.113 (2014).
      3. Quadros RM, Miura H, Harms DW, Akatsuka H, Sato T, Aida T, Redder R, Richardson GP, Inagaki Y, Sakai D, et al. Easi-CRISPR: a robust method for one-step generation of mice carrying conditional and insertion alleles using long ssDNA donors and CRISPR ribonucleoproteins. Genome Biol. 2017;18(1):92.
      4. Kan Y, Ruis B, Takasugi T, Hendrickson EA. 2017. Mechanisms of precise genome editing using oligonucleotide donors. Genome Research  27, 1099–1111.

友情链接: 国家实验细胞资源共享平台 ATCC Zhang Lab
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