ClonePlus™

  • 细胞基因表达

VIRUS-Free™稳转技术优势:

1、序列完整性好,可插入大片段,可以实现上百Kb的BAC片段的插入;

2、目的插入效率高,由于通过酶促反应,插入效率与病毒接近;

3、目的基因表达稳定,目的基因可以稳定表达传代20代;

4、实验时间只需要慢病毒系统时间一半,实验更加安全;

5、只需载体构建的费用就可以完成细胞稳转;


VIRUS-Free™ 是一种利用转座子系统进行细胞稳转株的构建和筛选的技术,以替代慢病毒感染构建稳转细胞株的技术。其载体中包括了转座子的识别区域,在转座酶的催化下,将目的片段从载体上或者BAC分子上切割下来形成一个小环结构,并在基因组里面的固定序列位置进行插入,从而实现稳转。目前已经在CAR-T细胞治疗中得到较多的临床应用,并充分体现出其:低成本、高效率、基因表达稳定的特点。


|   技术优势

1.序列完整性好,如果小环的结构被破坏则无法实现基因组插入;

2.可插入大片段,可以实现上百Kb的BAC片段的插入,而且能够保证其序列完整性,可以进行复杂的基因功能研究;

3.目的插入效率高,由于通过酶促反应,所以整个反应的过程效率远远高于DNA随机插入效率;

4.目的基因表达稳定,由于细胞插入的拷贝数相对于病毒来说比较稳定,在稳转株的构建过程中,细胞的表达更加稳定;

5.实验时间只需要慢病毒系统时间一半,实验更加安全;

6.可以实现:稳转之后对目的克隆进行检测后可以再将目的基因在原克隆移除,轻松实现加减法的对照。

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|   技术流程图


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|   VIRUS-Free™ 细胞基因稳转技术

2Kb以内基因插入(合成法)

插入片段小于2Kb的项目,我们将通过化学合成的办法获得质粒,并进行细胞转导,通过抗药性的筛选获得稳转克隆。

2-20Kb的基因插入(载体法)

插入片段2-8Kb的项目,我们将通过载体构建的办法来获得质粒,并进行细胞转导,通过抗药性的筛选获得稳转克隆。

Step1. 目的序列PCR扩增

Step2. 目的载体的构建获得表达载体

Step3. 目的细胞的转导和抗性药物筛选获得目的克隆

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BAC片段细胞系稳转(BAC修饰)

通过Red重组系统对BAC进行遗传修饰获得重组BAC,并进行细胞转导,通过抗药性的筛选获得稳转克隆。

Step1. 目的序列PCR扩增

Step2. 通过Red重组获得经过遗传修饰的BAC

Step3. 目的细胞的转导和抗性药物筛选获得目的克隆


友情链接: 国家实验细胞资源共享平台 ATCC Zhang Lab
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