Cas9X™

  • gRNA文库构建

定制个性化的CRISPR文库来进行大规模的功能性筛选研究。

根据您的需要,我们可以把构建的文库转化大肠杆菌,也可以以DNA或病毒的形式给您发货,我们定制的文库都会进行NGS测序验证以确定文库的质量。

同时我们提供全基因组的Dual-sgRNA敲除病毒文库,可以大幅加速您的研究速度。

|   CRISPR-gRNA文库筛选基因靶点服务

CRISPR-gRNA文库是高通量筛选靶基因的重要工具,可用于大规模或全基因组功能筛选,涉及信号通路、疾病、细胞药物应答、发育、基因调控等方面。海星生物在gRNA文库筛选方面拥有丰富的经验,能够帮助客户快速构建CRISPR KO(基因敲除)、CRISPRa(基因激活)文库、CRISPRi(基因抑制/沉默),也可以为客户提供全套的细胞功能筛选服务,涵括文库构建、病毒文库、细胞转染和筛选、NGS测序与数据分析服务。


|   CRISPR文库及其在遗传筛选中的应用
肿瘤耐药相关基因筛选
肿瘤转移相关基因筛选
克隆形成相关基因筛选
细胞增殖相关基因筛选
细胞信号通路相关基因筛选
病毒/细菌宿主相关基因的筛选
 
|   CRISPR文库遗传筛选的常规流程


/ueditor/image/2020/11/11/e585d09d7529d0cb22bb19bc4da395ed.png


|   服务类型介绍:



筛选类型原理靶向位置应用
基因敲除利用野生型Cas9或Cas9缺刻酶切割DNA。当细胞自身发生随机修复时,可以在靶位点引入随机突变。通常是编码区域主要用于编码基因的功能筛选
CRISPRa(基因激活)转录激活功能域(如VP64)融合无催化活性的Cas9(dCas9),用于激活靶位点调节基因表达。通常是启动子区和其他非编码调控区主要用于编码基因的功能获得筛选或非编码区域的调控功能筛选
CRISPRi(基因抑制/沉默)转录阻遏物(如KRAB)融合无催化活性的Cas9(dCas9),用于抑制靶位点调节基因表达。通常是启动子区和其他非编码调控区编码基因的功能缺失筛选或非编码区域的调控功能筛选



*海星生物提供现货供应,针对Human和Mouse全基因组范围的基因敲除(CRISPR KO)gRNA文库,实现全基因范围内功能基因的高通量快速筛选。

*海星生物还可以按照需求为客户设计合成靶向特定通路或者基因的gRNA订制文库。



应用案例文章:

《Nature Genetics》:A genome-wide CRISPR screen identifies a restricted set of HIV host dependency factors

美怀特海德研究所、拉根研究所和布罗德研究所的研究人员利用CRISPR-Cas9基因编辑技术找出三个有望用于治疗HIV感染的新靶标。

研究者利用CRISPR敲除筛选的策略,将影响HIV感染,同时又是细胞存活非必需的基因。一共找出5个基因,其中它三个在早前的利用RNA干扰(RNAi)的研究中并未被鉴定。


作者描述:我们的研究HIV感染的主要靶标,并找出在病毒对T细胞的感染中起着显著性作用的宿主基因。之前的研究已找出几种宿主依赖性因子,包括HIV侵入CD4阳性T细胞所需的两种蛋白:CD4分子、CCR5,被认为治愈HIV感染的一个人就是接受来自携带这种CCR5突变的供者的骨髓移植。2008年的三项利用RNAi鉴定潜在的宿主依赖性因子的研究鉴定出800多种可能的靶标;但是这些结果很少存在重叠,提示着存在较高的假阳性。原因是:RNAi抑制但不会完全阻断基因表达,这可能允许靶基因产生足够多的蛋白来允许HIV感染,而且它也能够抑制靶基因之外的其他基因表达,从而导致假阳性结果。利用CRISPR对源自HIV敏感性的CD4阳性T细胞的一种细胞系进行筛选,研究人员鉴定出5个基因:当让它们失活时,会让细胞免受HIV感染,同时不会影响细胞存活。


94a5165b8861cd74fa7a59dc594a2d7e.png


A pooled, genome-wide CRISPR screen for HIV HDFs. (a) Outline of the genome-wide CRISPR screen strategy. WT, wild type; KO, knockout. (b) Flow cytometry analysis (representative of five independent experiments) of cells infected with the HIV-1 strain JR-CSF and expressing GFP as a reporter of productive HIV infection. Where indicated, cells were transduced with sgCCR5 or an sgRNA that does not target protein-coding sequences
in the human genome (nontargeting control). (c) Flow cytometry analysis (representative of three independent experiments) quantifying CD4 and CCR5 expression on the surface of wild-type GXRCas9 cells and GXRCas9 cells that were transduced with the genome-wide sgRNA library and serially infected with HIV-1 strain JR-CSF. (d) Log2-transformed fold change in the abundance of the fifth most enriched sgRNA for every gene following HIV infection. See also supplementary Figure 1 and supplementary table 1. (e) Enrichment of individual sgRNAs for three candidate HDFs and two control genes. Values indicate log2-transformed fold change in abundance following HIV infection. Values for the uninfected group are from GXRCas9 cells that were transduced with the genome-wide sgRNA library and cultured for 3 weeks.


Cas9X 海星生物可以为病毒感染筛选相关的靶向基因提供:全基因组的gRNA病毒、细胞株的构建、验证细胞株的敲除等成熟的技术支撑。


友情链接: 国家实验细胞资源共享平台 ATCC Zhang Lab
版权所有:海星生物科技有限公司 Copyright © 2020 Haixing Biosciences. All rights reserved. 备案号: 湘ICP备2021005708号-1
新闻资讯 站点地图