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ClonePlus™技术是海星生物的核心技术创新,能够高效的获得基因编辑的单克隆
  • 克隆技术 ClonePlus™

ClonePlus™技术是Cas9X™海星生物在基因编辑技术使用过程中开发的创新性的基因编辑平台,包括了:生物信息学、细胞生物技术、分子高效率电转技术、细胞单细胞克隆高效形成技术等多维度的一个综合创新应用。


生物信息学:所有的使用的gRNA以及编辑策略的设计均由Cas9X™的生物信息团队的精确评估分析,保证能够达到优化的设计策略都达到更高的效率,包括了体外评估和切割效率的分数评估以及高通量的筛选的体系。


细胞生物学:ClonePlus™培养基

我们针对不同的细胞株和细胞来源,优化并建立起更加适合细胞实验的专有培养基,并对细胞培养的体系建立一一的关联,这个部分培养体系可以大幅的提升细胞株的活性,并大幅改善之前很多难以形成单克隆的细胞的单细胞克隆效果。并在自有培养体系的基础我们增加了自己的细胞库,目前已经涵盖了常用的细胞种类。


高效率电转:Smart-Opti™电转流程

我们需要提高每一种细胞的电转效率,找到高转染效率和高细胞存活率并存的条件。为此我们建立了针对每一种细胞的高通量、自动化的快速优化平台Smart-Opti™。只需要输入细胞系的名称,Smart-Opti™会从各大公开数据库中获取细胞的相关信息,并给出96个电转方案,按综合得分从高到低排列。同时系统会根据收集回来的历史数据判断安排多少组测试性价比更高,最多时可以一次性测试12个电转条件。细胞电转3天后,进行荧光信号检测,同步收集细胞存活率数据和荧光数据,匹配Smart-Opti™的自动分析系统,可瞬间获取优化的电转参数组合。整个优化过程只需要3天。经过优化后的细胞转染效率平均提高25%。


单细胞克隆:

细胞单克隆是一个非常不好做的实验,因为不是每种细胞都能够长单克隆,而且很多能够形成克隆的细胞的单克隆形成率很低(低于5%也是很常见的)。如果放到细胞系基因编辑这个领域里面一个最大的限制瓶颈就是:细胞的克隆形成率!如果我们通过简单的数学模型来重现这个过程就知道克隆形成率有多么的重要:

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由于基因敲除效率%(E)是一个固定的常数:只和基因的 位置,基因功能,gRNA的选择,选择的方法论等有关;

细胞基因拷贝数(N):不同的细胞株,不同来源的细胞的克隆拷贝数不一样,很多细胞都不是二倍体;

所以克隆形成率(C):直接影响到敲除效率的高低,也是基因编辑效率高低较为直接的一个系数;

ClonePlus™是海星生物平台的研发人员经过两年时间研究,就是为了彻底解决细胞克隆形成率对基因编辑效率的影响。最终将C系数固定在:0.98-1,从而大幅的提升了基因编辑和基因敲除的有效率,大幅加速了服务的过程。

主要的提升克隆形成率的核心要素包括:

1、筛选状态良好稳定的细胞株作为使用的细胞株;

2、筛选更加高效的克隆形成培养基和培养粘附材质,直接解决了克隆形成的问题;

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                                                    ClonePlus™验证过的细胞株


友情链接: 国家实验细胞资源共享平台 ATCC Zhang Lab
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