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THP-1细胞培养经验与要点

该细胞从一名1岁的患有急性单核细胞性白血病的男孩的外周血中分离建立。该细胞可以吞噬乳胶颗粒和激活的红细胞,细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白,表达C3R和FcR;可受佛波酯TPA诱导向单核系方向分化;可作为转染宿主。

细胞名称:人单核细胞白血病细胞
细胞简称:THP-1
细胞别名:THP1; THP 1; THPI; THP-1(ATCC); O-THP-1; Tohoku Hospital Pediatrics-1
产品货号:TCH-C361
细胞形态:单核细胞样
生长特性:悬浮生长
培养体系:RPMI-1640+10%FBS+0.05 mM β-mercaptoethanol+1%P/S

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THP-1细胞培养注意要点

➊ THP-1细胞为悬浮生长,部分细胞聚集成团,部分细胞分散
➋ THP-1细胞更喜欢酸性环境,在偏酸性环境中,THP-1生长更快,所以当培养基稍微变黄(呈橘红色)时,是适合细胞生长的,此时补液或半换液即可。
➌ THP-1细胞有密度依赖性,THP-1细胞密度低时,生长较慢,培养密度维持在4 ~8×105 /mL为宜;超过2.0 ×106 /mL则需要传代。
➍ THP-1细胞对机械力较敏感。正常培养时,应尽量避免吹打力道过大。暴力吹打会使细胞分化和死细胞增加。
➎ 血清质量差异可能引起细胞状态变化,建议选用高质量的胎牛血清。


THP-1细胞换液


➊ 补液法:培养基变黄时可补加适量(1~2mL)新鲜培养基,补加1-2次之后,用离心的方式全部换液,离心1200rpm (约250g)3分钟。
➋ 半换液法:以T25瓶子为例,瓶子里装有5mL培养基。竖起瓶子静置一段时间,待细胞沉底,小心吸出2.5mL的培养基,转移到离心管,离心1200rpm (约250g)3分钟,检查有没有沉淀,以免损失细胞;原瓶补充2.5mL新鲜培养基,离心管里若有细胞,则用新鲜培养基重悬后放回原瓶。

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[半换液操作示意图]

➌ 如果换液后第二天培养基就变得很黄,同时镜下检查未污染,说明细胞密度大,应该传代。


THP-1细胞传代


➊ 摇晃培养瓶,把细胞摇匀,均分到两个瓶子里,每瓶再补充等量培养基。
➋ 离心法:离心后计数,按照40-50万细胞/mL的密度接种到T25瓶里,瓶中培养基量以5mL为宜。不方便计数时,按1:2比例传代。
➌ 死细胞或细胞碎片较多的情况下,建议用离心法传代,离心转速可适当降低(推荐800~1000rpm或160~200g)。


THP-1细胞冻存

➊ 由于THP-1是悬浮细胞,更易受到冻存影响,建议加大冻存密度,大约200万-300万/mL为宜,以提高复苏存活率。
➋ THP-1细胞对冻存温度比较敏感,建议冻存后立即转入-80℃冰箱,长期保存应放在液氮罐中。
➌ 经测试,THP-1使用非程序降温冻存液的复苏存活率高于程序降温冻存液,推荐使用HyCyte™一步冻存液(GUCP-R201)。
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THP-1细胞复苏


THP-1细胞复苏后通常需要3-5天恢复状态,建议复苏后48小时内不要进行操作。


THP-1培养常见问题及解决方法


➊ 培养基里一定要加β-巯基乙醇( β-mercaptoethanol)吗?

β-巯基乙醇是一种常用的培养补充剂,有抗氧化的作用,可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时,可适当增加巯基乙醇的比例(不超过标准量的1.5倍)。


➋ 悬浮细胞在镜下观察时,难以聚焦或估算密度怎么办?

悬浮细胞会随着液体流动,不容易聚焦,静置5-10分钟使细胞沉底,之后再轻轻放上显微镜观察,将有助于聚焦和估算细胞密度。


➌ THP-1细胞在培养过程中细胞发生聚团怎么办?

少量细胞聚团,呈葡萄串状,属于正常现象,特别是细胞密度较低时,易出现这种情况。更换血清品牌或增大血清比例(不超过20%)有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散,等待密度高时,会自己分散开。


➍ THP-1细胞在培养过程中细胞发生贴壁怎么办?

少量细胞贴壁属于正常情况,将细胞悬液转移至新瓶中即可。当贴壁细胞的比例高于20%,说明细胞生长环境有异常,需排查培养箱设置、培养基成分,以及培养器皿是否异常。

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[THP-1细胞在密度较高时不聚团]


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