|   临床级VIRUS-Free™技术： 

致敬伟大的芭芭拉·麦克林托克，她发现的转座子机制在我们这个时代，依然是一个非常出色的基因研究工具！芭芭拉·麦克林托克（英语：Barbara McClintock）1983年获得诺贝尔生理学或医学奖，是首位没有共同得奖者的女科学家。

——VIRUS-Free™ 技术研究团队

在过表达稳定细胞株构建技术基本被病毒法垄断的时候，其实还有一个很重要的技术在不断的进化中！如今该技术又再一次走人了人们的视野：VIRUS-Free™基于转座子系统的稳转细胞系构建技术，该技术目前已经有多个临床项目在进行中，包括了CAR-T细胞和很多细胞基因编辑临床项目。

而回望这个技术的研发之路确实不平坦，就如这个技术的出生一样，芭芭拉不知道受到了多少的白眼和非议，但是迟来的诺奖却给予了她肯定。

|   由于我们研发的定位要素包括：
1.  低成本（目前CAR-T的问题就是价格高）
2.  表达稳定可控（临床应用肯定要在体内多次分裂不丢失）
3.  序列完整，没有其他蛋白结构产生；
4.  可移除（稳转之后可以移除）

|   而这个目标基本是病毒法无法达到的：
1.  病毒很容易受到免疫抑制或者其启动子受到影响，在多代之后沉默不表达；
2.  病毒表达蛋白的完整性受到病毒包装过程的载体质量的影响；
3.  不可能移除；
4.  插入拷贝数不确定，表达克隆差异很大；
5.  片段大小非常有限；

所以我们聚焦到了：转座子系统，而其中的困难就是对转座子载体的研发上。具体过程涉及多项研发的核心内容，就不过多透露。

经过两年的开发：我们推出了VIRUS-Free™ 技术，正好可以完美的满足我们的需求，下面是关于技术的介绍材料：

|   技术优势：
1.序列完整性好，如果小环的结构被破坏则无法实现基因组插入；
2.可插入大片段，可以实现上百Kb的BAC片段的插入，而且能够保证其序列完整性，可以进行复杂的基因功能研究；
3.目的插入效率高，由于通过酶促反应，所以整个反应的过程效率远远高于DNA随机插入效率；
4.目的基因表达稳定，由于细胞插入的拷贝数相对于病毒来说比较稳定，在稳转株的构建过程中，细胞的表达更加稳定；
5.实验时间只需要慢病毒系统时间一半，实验更加安全；
6.可以实现：稳转之后对目的克隆进行检测后可以再将目的基因在原克隆移除，轻松实现加减法的对照。

 
|   技术流程图：

|   VIRUS-Free™ 细胞基因稳转技术

2Kb以内基因插入（合成法）
      插入片段小于2Kb的项目，我们将通过化学合成的办法获得质粒，并进行细胞转导，通过抗药性的筛选获得稳转克隆。
2-20Kb的基因插入（载体法）
      插入片段2-8Kb的项目，我们将通过载体构建的办法来获得质粒，并进行细胞转导，通过抗药性的筛选获得稳转克隆。
      Step1. 目的序列PCR扩增
      Step2. 目的载体的构建获得表达载体
      Step3. 目的细胞的转导和抗性药物筛选获得目的克隆

BAC片段细胞系稳转（BAC修饰）：通过Red重组系统对BAC进行遗传修饰获得重组BAC，并进行细胞转导，通过抗药性的筛选获得稳转克隆。
      Step1. 目的序列PCR扩增
      Step2. 通过Red重组获得经过遗传修饰的BAC
      Step3. 目的细胞的转导和抗性药物筛选获得目的克隆