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病毒常见问题汇总

海星生物对病毒包装和载体构建有多年的技术经验,针对病毒包装 、载体构建我们整理了以下几个常见问题。


1

什么是MOI?


在微生物学中, MOI是病原体(如噬菌体或病毒、细菌等)与感染目标(如细胞)的比率。对于病毒, MOI是病毒颗粒数量与特定空间中存在的目标细胞数量的比率。通常可将某株细胞有80%被感染时所用的病毒颗粒数和细胞数目的比值作为该株细胞的MOI。



2

如何稀释病毒?


您可使用完全培养基、PBS液等将病毒稀释到需要的滴度。如将滴度为5 x10 2TU/ml的病毒稀释到1 x10TU/ml,则需取20 µl病毒液加入到80 µl的完全培养基中。


3

用于病毒感染的细胞接种量是多少?


根据细胞增殖的速度调整细胞接种量,以保证在感染后3天左右细胞刚好快长满培养皿底部为宜。针对大部分细胞系:传代周期在2-3天,感染时细胞铺板的密度保持在20-30%左右,则72h后细胞增殖后铺板密度约在90%左右;针对某些原代细胞:由于细胞增长缓慢,可以在接种时提高汇合度到50%~ 60%,但要确保在感染后3天时细胞汇合度达到90%~ 100%;针对非分裂细胞:如神经元细胞,接种后不再增殖,此时可以按照80%的汇合度进行接种。


4

如何提高病毒对细胞的感染效率?


病毒对细胞的感染效率受细胞自身生长的状态,细胞数量,细胞被病毒感染的难易程度等多个因素影响。因此保证细胞生长状态良好,轮廓清晰,合适的细胞密度,选择最优的感染条件(如合适的MOI值)可以更好的保证感染效率。对于悬浮细胞,可采用离心感染方法,减少病毒感染时的体积,从而提高感染效率。如可以在加入病毒后将细胞培养板密封,用离心机在1000g条件下离心1h,再放回培养箱中正常培养。


5

加入病毒病毒后,细胞死亡很厉害,该如何处理?

病毒有一定的细胞毒性,如果培养过程中细胞出现了明显的病变或细胞状态变差,建议将转导时间缩短至5~8小时之间。或者调整并降低感染的MOI值,并且在感染后4小时、 8 小时、 12小时对细胞进行观察,若发现细胞状态变差时,则需要立刻对细胞进行换液操作,使用新鲜的完全培养液替换病毒感染培养液


6

细胞能被病毒感染,但为何GFP荧光很弱?


GFP病毒感染细胞后,细胞中荧光强度取决于病毒进入到细胞的颗粒数、细胞本身的增殖状态、细胞类等因素。在增殖较慢的细胞中感染病毒后, GFP蛋白表达达到峰值需要较长的时间。 


7

腺病毒载体在体外实验中应注意哪些问题?


GFP病毒感染细胞后,细胞中荧光强度取决于病毒进入到细胞的颗粒数、细胞本身的增殖状态、细胞类等因素。在增殖较慢的细胞中感染病毒后, GFP蛋白表达达到峰值需要较长的时间。 


8

如何确定我所用的目的细胞是否可以被腺病毒感染?


腺病毒有广泛的宿主范围,它可以感染人类或者其他哺乳动物细胞系或原代细胞,包括可分裂的和不可分裂的细胞。只有少数细胞系不被感染,例如一些淋巴细胞系对腺病毒有更强的抵抗性。为了确认所使用的目的细胞是否能够被腺病毒感染,需要通过带有标记(如GFP)的腺病毒对目的细胞进行预实验。


友情链接: 国家实验细胞资源共享平台 ATCC Zhang Lab
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