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悬浮细胞基因编辑

Cas9X™ | 海星生物在实验室工作的过程中,我们与很多细胞基因敲除的实验室合作,在血液细胞研究中很多悬浮的细胞株又是必须用到的,那我们一起来如何快速的搞定悬浮细胞基因敲除细胞系的构建工作。


悬浮细胞的基因敲除有很大的困难就是细胞的克隆形成周期非常长,另外这个细胞对慢病毒的感染效率并不太高,普通的电转的效果也不是很高,所以做起来就困难很多了。另外悬浮细胞在培养的过程中也有其他的问题,就是其容易成团的问题。下面我们就逐步讨论这THP-1和K562两个细胞基因敲除的操作要点和ClonePlus™技术的应用。


1. THP-1和K562细胞的克隆形成的困难;


  • 悬浮细胞只能用极限稀释法做单克隆,但是很多悬浮细胞特别是THP-1和K562细胞在细胞培养的过程中,单个细胞的时候增殖极慢,要等2-3周的时间才能恢复到正常的细胞增殖速度;

  • 而且很多细胞的克隆形成率非常低:细胞克隆形成率=形成克隆的细胞/接种的细胞*100%,一般的细胞的比例也就是5%-30%;


2. THP-1和K562细胞的慢病毒感染率低的原因;


  • 由于THP-1和K562细胞都是悬浮状态,细胞比表面积更小,同时细胞表面的病毒受体的表达量更少;

  • 同时THP-1和K562细胞的在病毒感染的时候容易出现死亡,并由于基因组的DNA会形成粘性团块,将所有的细胞黏连在一起,导致其他细胞也会死亡;

  • 同时病毒在培养基里面是以团块聚合存在,容易沉淀到底部,所以悬浮的感染更加困难;


3.THP-1和K562细胞的药物筛选困难;


  • 由于药物筛选过程中不同的细胞代谢速度不一致,导致药物浓度在不同实验室差异较大;

  • 同时由于细胞在药物筛选的时候出现的死亡也会导致其他的细胞黏连在一起,导致细胞状态也快速变差;

  • 还有就是THP-1也容易出现被诱导的分化;


4.如何快速的活动THP-1细胞和K562细胞的基因敲除细胞系;


  • ClonePlus™就是专门针对THP-1和K562细胞专门做过优化,特别适合此类细胞克隆形成;

  • Cas9X™通过筛选,建立起THP-1和K562细胞株,大大的改善了克隆形成率和细胞的实验特性,大幅的提升的这两株细胞的克隆形成率;

  • 我们同时通道了大量的案例,优化了THP-1和K562细胞的基因敲除操作参数,大幅的提升了技术的效率;

按照上述,Cas9X™可以为科研提供高效的THP-1和K562此类细胞的基因敲除服务,周期是5-9周的时间。


友情链接: 国家实验细胞资源共享平台 ATCC Zhang Lab
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