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如何在细胞系中敲除原癌基因或抑癌基因?

我们一般在细胞基因敲除的时候都是在肿瘤细胞系中进行的,我们一般将要敲除的基因分为两类:促进细胞增殖基因(原癌基因),抑制细胞增殖基因(抑癌基因),所有的后面细胞的操作都要和这两个概念有关。

促进细胞增殖基因:该基因在细胞代谢、分裂、细胞周期等具有促进的作用,可以使得细胞的增殖速度加快,对细胞生长有优势;

抑制细胞增殖基因:该基因是抑制细胞代谢、分裂或者对细胞的分裂有严格的调控作用,可以使得细胞的增殖处于正常速度或者是不失控的状态下,对细胞的生长处于正常状态非常重要。


一般对促进细胞增殖基因(原癌基因)的敲除会导致细胞的代谢通路减少,或者细胞的增殖变缓慢,导致细胞的扩增出现异常。所以在做细胞敲低的时候,经常会出现的问题就是:第一代敲低效果不错,但是后续随着传代,导致细胞的敲低效果不断下降。

原因就是:由于我们的培养系统会不断的富集其中增殖速度快的细胞,而失去增殖速度慢或者不增殖的细胞,所有对于混合的克隆细胞,就会出现上述的问题。最好的解决的办法就是:严格单克隆,使得细胞的基因型高度一致,可以一致化的细胞表型筛选。

其次就是对抑制细胞增殖基因(抑癌基因)一般会让细胞的增殖加速,或者增加新的代谢途径,所以细胞扩增会更快一些;做敲低的效果就会比较稳定,也会比较容易获得实验结果。所以在做敲除的时候就不用太担心这个问题。


原癌基因包括下面的基因家族:

1.ras家族

ras基因家族是最常见的癌基因家族,对正常细胞的增殖和分化起重要调节作用,是目前所知最保守的一个癌基因家族。

2.myc家族

myc基因是目前研究最多的一类核蛋白类癌基因,包括C—myc、N—myc、L—myc、R—myc4种。myc基因在恶性肿瘤中的显著特征之一就是经基因扩增和基因突变的方式激活,出现双微染色体和染色体的均染区。激活后的myc基因大量表达myc蛋白,对细胞生长分化起重要作用。

3.src家族

产物具有蛋白酪氨酸激酶活性,能促进增殖信号的转导,定位于细胞内面或跨膜分布。

4.sis家族

编码的p28,能刺激间叶组织的细胞分裂增殖。

5.myb家族

核内转录因子。

做上述的基因家族的敲除需特别注意我们说的问题。



友情链接: 国家实验细胞资源共享平台 ATCC Zhang Lab
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